将兔仰卧固定在手术台上，把左侧胸部相当于心脏的部位的被毛剪去，用碘伏、酒精消毒皮肤。实验者用左手触摸左侧第3-4肋间，选择心跳最明显处作穿刺。一般由胸骨左缘外3mm处将注射针头插入第三肋间隙。穿刺时最好用左手触诊心跳，在触诊的配合下穿刺。 

经6-7天后，可以重复进行心脏穿刺术。家兔一次可采取全血量的1/6-1/5。